葉綠素是植物光合作用中的重要光合色素，通過(guò)測(cè)定浮游植物葉綠素，可掌握水體的初級(jí)生產(chǎn)力情況。浮游藻類里常見的葉綠素有a、b、c、d四種類型，其中，葉綠素a在一切浮游藻類里大約占有機(jī)物干質(zhì)量的1%~2%，是環(huán)境監(jiān)測(cè)中表征浮游植物生物量最常用的指標(biāo)之一，所以常被用于研究地表水環(huán)境的富營(yíng)養(yǎng)化。同時(shí)，葉綠素a也被用來(lái)評(píng)價(jià)水體富營(yíng)養(yǎng)化水平，以及衡量水體水質(zhì)。下面我們來(lái)看一下水質(zhì)葉綠素a的測(cè)定方法有哪些。

1、分光光度法

分光光度法屬于光度法的一種，該分析方法采用的原理是物質(zhì)分子對(duì)光具有選擇吸收的特性。葉綠素a的最大吸收峰位于663nm，在一定濃度范圍內(nèi)，其吸光度與濃度符合朗伯-比爾定律，可根據(jù)吸光度-濃度之間的線性關(guān)系，計(jì)算葉綠素a的濃度。

2、熒光光譜法

葉綠素分子被紫外光照射后可發(fā)射出特征紅色熒光，其熒光強(qiáng)度與葉綠素濃度呈正比，據(jù)此可釆用熒光法進(jìn)行葉綠素a的定量分析。普通萃取熒光法的操作步驟主要為標(biāo)準(zhǔn)溶液的配制、標(biāo)準(zhǔn)曲線的制定和樣品熒光強(qiáng)度的測(cè)定。將提取的新鮮綠色植物液中的葉綠素作為儲(chǔ)備液，用分光光度法標(biāo)定其濃度：將標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液稀釋配制成標(biāo)準(zhǔn)系列，用熒光光度計(jì)測(cè)定標(biāo)準(zhǔn)系列的熒光強(qiáng)度，繪制葉綠素a標(biāo)準(zhǔn)曲線；由樣品測(cè)得的熒光強(qiáng)度從葉綠素a標(biāo)準(zhǔn)曲線上查得相應(yīng)濃度。

3、色譜法

高效液相色譜(HPLC)法是一種廣泛應(yīng)用于化學(xué)、醫(yī)藥、生命科學(xué)等領(lǐng)域的分析手段。使用高效液相色譜法測(cè)定葉綠素a時(shí)，需要破壞測(cè)定藻類的原樣，前處理方法與分光光度法的前處理方法相似。

4、遙感監(jiān)測(cè)

水質(zhì)遙感監(jiān)測(cè)是通過(guò)監(jiān)測(cè)一定波長(zhǎng)范圍內(nèi)的水體輻射值，定量分析水體反射光譜特征與水質(zhì)指標(biāo)間的關(guān)系，進(jìn)而構(gòu)建水質(zhì)指標(biāo)反演算法的一類方法體系。遙感技術(shù)測(cè)定葉綠素a近年來(lái)已經(jīng)被國(guó)內(nèi)外許多學(xué)者證實(shí)具有監(jiān)測(cè)范圍廣、速度快、成本低和便于進(jìn)行長(zhǎng)期動(dòng)態(tài)監(jiān)測(cè)的優(yōu)勢(shì)。

5、pH值法

pH值法是研究水域生態(tài)系統(tǒng)初級(jí)生產(chǎn)量的又一種方法。該方法測(cè)定原理主要是依據(jù)初級(jí)生產(chǎn)量與溶于水中的二氧化碳有定的關(guān)系，即水體中的pH值是隨著光合作用中吸收二氧化碳和呼吸過(guò)程中釋放二氧化碳而發(fā)生變化的。使用pH電極連續(xù)記錄水體的pH值變化，由此分析光合量和呼吸量，從而來(lái)估計(jì)初級(jí)生產(chǎn)力。

葉綠素a的測(cè)定方法有分光光度法、熒光光譜法、色譜法和遙感監(jiān)測(cè)等方法，其中，分光光度法和熒光光譜法應(yīng)用最為廣泛。其實(shí)對(duì)于水質(zhì)葉綠素a監(jiān)測(cè)方法的選取，應(yīng)根據(jù)實(shí)際情況進(jìn)行選擇，綜合考慮多種因素，如研究目的、對(duì)樣品前處理精度要求、樣品種類的要求、儀器靈敏度要求、儀器成本等。